Shaanxi scientific instrument service network
研究意义:目前乳制品中的叶酸测定都是微生物培养法、固相萃取色谱测定法,由于方法的本身原因,样品处理困难,回收率低下,不确定因素多。本法针对上述问题进行了方法学的研究,简化了样品处理,大大提高了回收率,为食品检验提供了良好的借鉴。
具体的实验介绍如下:
仪器:安捷伦-1260型高效液相色谱仪;KQ-500E型超声仪。
试剂试药:甲醇(CNW 色谱纯);纯化水;叶酸标准品(德国DR 叶酸工作标;批号:1203005-6
含量:99.0%); 三乙胺;冰醋酸;已烷磺酸钠;
分析方法及条件:(HPLC法)
色谱条件
色谱柱:CNW ODS C18柱,250mm×4.6mm,5μm.
流动相:取500ml去离子水,加10ml冰醋酸,6ml三乙胺,0.065g已烷磺酸钠,用去离子水定容至1L,过0.45μm滤膜,取上述溶液830mL与170ml甲醇混合,脱气.
流速:1.0ml/min
柱温:35℃
进样量:30µl
检测器:紫外检测器275nm
运行时间:25min
1、线性范围确认:
1.1试验方法:
叶酸标准贮备液的配制:精确称取叶酸约10 mg于50ml棕色容量瓶中,用0.1mol/ml碳酸钠溶解并定容至刻度,摇匀,浓度约为200μg /mL,放在4℃的冰箱中储存备用。
1.2标准工作曲线绘制:
精密吸取叶酸标准贮备液2.00mL于100mL棕色容量瓶中,加0.1mol/ml碳酸钠稀释至刻度,摇匀;吸取2.00ml到50ml棕色容量瓶中,即得叶酸标准使用液,经0.45μm的微孔滤膜过滤,取滤液分别进样5ul、10ul、15ul、20ul、25ul。
1.3试验数据:(色谱图见图1)
标准序号 |
浓度X(ug/ml) |
叶酸峰面积(Y) |
STD1 |
0.0269416 |
2.80592 |
STD2 |
0.0568995 |
5.89817 |
STD3 |
0.0841775 |
8.71379 |
STD4 |
0.111756 |
11.56038 |
STD5 |
0.138410 |
14.31165 |
线性方程 |
y=103.21962x+0.0250713 |
|
相关系数(R) |
0.99988 |
1.4试验结论:
线性评价:相关系数 R为0.99988,所以用该方法测定叶酸的含量,在浓度为0.0269ug/ml至0.1384ug/ml之间呈现良好的线性。
2、精密度试验:
2.1叶酸标准贮备液的配制:精确称取叶酸约10 mg于50ml棕色容量瓶中,用0.1mol/ml碳酸钠溶解并定容至刻度,摇匀,浓度约为200μg /mL,放在4℃的冰箱中储存备用。
2.2精密称取约0.25g样品,置于25ml棕色容量瓶中,加0.1mol/ml碳酸钠5ml,超声15min使溶解,并用纯化水定容至刻度,摇匀,经0.45μm的微孔滤膜过滤,即为供试品溶液;
取滤液进样30ul。
2.3标准工作曲线绘制:
精密吸取叶酸标准贮备液2.00mL于100mL棕色容量瓶中,加0.1mol/ml碳酸钠稀释至刻度,摇匀;吸取2.00ml到50ml棕色容量瓶中,即得叶酸标准使用液,经0.45μm的微孔滤膜过滤,取滤液分别进样5ul、10ul、15ul、20ul、25ul。
2.4试验数据:(色谱图见图2)
样品名称 |
序号 |
称样量(g) |
峰面积 |
含量(µg/g) |
平均含量(µg/g) |
RSD(%) |
孕妇乳清蛋白粉 (批号:20110901) |
1 |
0.2520 |
7.20530 |
0.690 |
0.72 |
3.4% |
2 |
0.2520 |
7.48994 |
0.717 |
|||
3 |
0.2546 |
7.72715 |
0.732 |
|||
4 |
0.2596 |
7.60088 |
0.706 |
|||
5 |
0.2521 |
7.84317 |
0.751 |
|||
6 |
0.2557 |
7.93939 |
0.749 |
2.5试验结论:6份样品含量的RSD(%)分别为:3.4%,其RSD(%)小于5.0%,表明该方法有较好的精密度。
3、回收率试验:
3.1试验方法:
对照品和样品的处理方法见精密度试验。
加标样品的处理:精密称取约0.25g样品6份,置于25ml棕色容量瓶中,分别加0.8ug/ml的叶酸对照液2.0ml,再分别加0.1mol/ml碳酸钠5ml,超声15min使溶解,并用纯化水定容至刻度,摇匀,经0.45μm的微孔滤膜过滤,作为加标溶液;取该加标溶液30ul进样。
3.2试验数据如下:【试验样品为:孕妇乳清蛋白粉(批号:20110901)】
回收率试验结果表(色谱图见图4)
样品名称 |
序号 |
称样量(g) |
峰面积 |
含量(µg/g) |
平均含量(µg/g)、回收率(%) |
平均回收率(%) |
RSD(%) |
孕妇乳清蛋白粉(批号:20110901) |
1 |
0.2520 |
7.20530 |
0.690 |
0.72 |
--- |
3.4% |
2 |
0.2520 |
7.48994 |
0.717 |
||||
3 |
0.2546 |
7.72715 |
0.732 |
||||
4 |
0.2596 |
7.60088 |
0.706 |
||||
5 |
0.2521 |
7.84317 |
0.751 |
||||
6 |
0.2557 |
7.93939 |
0.749 |
||||
孕妇乳清蛋白粉(批号:20110901))+100%标 |
7 |
0.2401 |
14.10277 |
1.378 |
0.9991 |
1.048 |
4.2% |
8 |
0.2578 |
15.20848 |
1.426 |
1.0826 |
|||
9 |
0.2502 |
14.83464 |
1.433 |
1.0614 |
|||
10 |
0.2600 |
14.56387 |
1.354 |
0.976 |
1.012 |
2.9% |
|
11 |
0.2567 |
14.74755 |
1.389 |
1.0206 |
|||
12 |
0.2522 |
14.71128 |
1.410 |
1.0349 |
测得对照品投入量=加标样品测得量- 样品测得量
回收率(%)=测得对照品投入量/投入量
3.3试验结论:孕妇乳清蛋白粉加标100%的回收率分别为99.91%、108.26%、106.14%、97.60%、102.06%、103.49%,平均回收率分别为:104.8 %、101.2%,相对标准偏差(RSD)分别为4.2%、2.9% ,均在可接受范围内(要求回收率在真实浓度的90.0%~110.0%,回收率的RSD值应≤5.0%),结果均符合可接受标准。
4.样品中叶酸含量测定:
含量测定试验结果表(色谱图见图4)
样品名称 |
序号 |
称样量(g) |
峰面积 |
含量(µg/g) |
平均含量(µg/g) |
RSD(%) |
孕妇乳清蛋白粉 (批号:20110901) |
1 |
0.2520 |
7.20530 |
0.690 |
0.72 |
3.4% |
2 |
0.2520 |
7.48994 |
0.717 |
|||
3 |
0.2546 |
7.72715 |
0.732 |
|||
4 |
0.2596 |
7.60088 |
0.706 |
|||
5 |
0.2521 |
7.84317 |
0.751 |
|||
6 |
0.2557 |
7.93939 |
0.749 |
试验结论:样品孕妇乳清蛋白粉(批号:20110901)叶酸含量为0.72mg/100g,符合规定,(质量标准要求为0.5~1.1mg/100g)【按工艺规程的配方计算理论含量为:0.69mg/100g,外检含量为:0.63mg/100g】。
5.结论:通过对叶酸的含量测定方法进行线性、精密度、回收率试验,证明含量测定方法科学有效,能对孕妇乳清蛋白粉中叶酸的含量起到质量控制的目的。
扫二维码用手机看
-
Tel
-
Message
-
返回顶部
地址:陕西省西安市乐游路8号 电话:029-85528327 传真:029-85533605 网址:www.sxkq.cn
Copyright @ 2022 陕西省科学仪器服务网 陕ICP备05004206号 网站建设:中企动力 西安 seo标签